《文登特色整骨之关节疾病中西医诊治研究与经验传承》姜红江|(epub+azw3+mobi+pdf)电子书下载

图书名称：《文登特色整骨之关节疾病中西医诊治研究与经验传承》

【作　者】姜红江

【页 数】 345

【出版社】 北京：中国纺织出版社 , 2022.01

【ISBN号】978-7-5180-8930-7

【分 类】关节疾病-中西医结合-诊疗

【参考文献】 姜红江. 文登特色整骨之关节疾病中西医诊治研究与经验传承. 北京：中国纺织出版社, 2022.01.

图书封面：

图书目录：

《文登特色整骨之关节疾病中西医诊治研究与经验传承》内容提要：

本书提纲挈领，由点及面，系统介绍了骨关节疾病的特点、临床表现、诊断、发病原因，以及中西医结合诊治的理论基础与临床实践等内容。本书编者参考国内外大量的文献，并结合自己的临床经验，系统归纳总结，力求保持中西医结合的特点，体现继承性、科学性、权威性、时代性、简明性、实用性。本书即保持全书的系统性，又注重对目前国内外研究比较深入的疾病、热点问题浓墨重彩。其内容丰富，文字简练，科学实用，操作性强，是一本值得参考的骨科书籍，可供基层医师和患者阅读。

《文登特色整骨之关节疾病中西医诊治研究与经验传承》内容试读

第一篇基础研究

第一章

骨髓间充质千细胞在骨伤疾病治疗中的应用研究进展

[关键词]骨髓间充质干细胞：骨伤；进展

干细胞是指存在于组织中数目很少的一些分化相对静止的细胞(resting cell)。这些细胞具有两个方面的重要潜能特点，即具有不对称性细胞分裂的能力和自我更新的能力。1867年德国科学家Cohnheim在研究创伤愈合时提出了骨髓中存在非造血干细胞的观点。l976年

Friedenstain等[以确凿的证据证实骨髓中除含有造血干细胞外，还含有集落形成的成纤维祖细胞或成纤维集落形成单位，这些细胞在体内处于休眠状态，而在体外适当条件的刺激下可以进入细胞周期，从而形成类似于骨或软骨碎片的细胞集落，这种细胞称为骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)。Friedenstain等于l987年又发现在塑料培养皿中培养的贴壁的骨髓单个核细胞在一定条件下可分化为成骨细胞、成软骨细胞、成脂肪细胞和成肌细胞，这些细胞扩增20~30代后仍保持其多项分化潜能，其连续传代培养或冷冻保存后仍具有多项分化潜能，而且可以保持正常的核型和端粒酶活性，但不能自发分化☒]。只有在体外特定的诱导条件下，可以向成骨细胞、软骨细胞、肌细胞、神经细胞等方向分化。基于这种强大的分化潜能及易于分离培养、遗传相对稳定的特性，使其在组织工程、细胞治疗方面得到了日益广泛的应用，在骨伤科领域也显示出了其不同于传统治疗方式的优越性。现将

BMSC在骨伤科的应用综述如下。

一、骨组织工程

将骨髓间充质干细胞作为种子细胞与支架材料复合之后移植到创伤部位，是一种修复骨缺损的良好方法。有学者[)在培养基内加入抗坏血酸后间充质干细胞排列紧密呈片状生长，将间充质干细胞片与去除矿物质的移植骨片结合植入受损部位，3周后形态学、组织学、免疫组织化学观察显示，植入物的结构与正常骨膜相似，并向成骨、软骨分化。高强度多孔支架材料和间充质干细胞是骨组织工程的必备条件。学者们幻研究了间充质干细胞在带有涂层的多孔钛支架中的生长情况（多孔钛支架经快速成型技术制成，Alamar Blue法提示低原始细胞黏附率为40%)，培养3天后钛支架被植入自体大鼠皮下，观察4周，组织学显示矿化胶原组织产生。BMSC复合支架材料治疗骨缺损的实验研究中，Borden等[]在大段骨缺损动物模型中

应用BMP-7及BMSC复合多聚微球基质材料，发现BMP-7能诱导新骨长入，穿过移植物，使

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BMSC的成骨活性增强。Quarto等)用BMSC与羟基磷灰石构建组织工程骨植人骨缺损区，

均能完全恢复肢体功能。朱文雄等[)采用第5代SD大鼠BMSC,经荧光标记后，调配制成的

1×10/mL细胞浓度后与BMG共同培养6小时，然后植入SD大鼠双侧胫骨的实验性骨缺损中，术后8周胫骨缺损区可见大量新生不规则骨纤维组织、软骨及纤维骨痂填充，可见骨细胞、

骨组织和骨小梁，已形成骨髓腔。李海丰等[]取第3代BMSC,以无血清DMEM制成

5×105/mL的细胞悬液符合同种异体冻干骨复合物修复12mm节段性骨-骨膜缺损。8周时骨折端的间隙被类骨质充填，并出现大量外骨痂，16周时所有植入物都与桡骨干骨性愈合，并

有新骨髓腔生成。结果表明，BMSC与载体结合植入体内后，直接增强了病变局部细胞介导的

骨再生能力，能够快速修复大段骨缺损。王之允等用第2代BMSC符合异种松质骨载体移

植于新西兰大白兔胫骨缺损模型，术后16周缺损区骨皮质与骨端皮质连续，塑形尚可，肉眼无

法分辨缺损区；24周胫骨塑形完全。以上结果表明，BMSC用于骨组织工程学治疗骨缺损具

有一定的优越性，为临床治疗骨缺损提供了一种新的治疗思路。沈兵等认为自体BMSC复

合同种异体生物衍生骨支架构建的组织工程骨与自体髂骨游离移植修复四肢骨缺损的临床疗效有显著差异。

二、软骨组织工程

骨关节炎或类风湿性关节炎引起的软骨缺损日益增多。自体软骨组织取材小，难以达到应有的细胞数量，在体外培养扩增细胞易发生“去分化”而失去原有的特征。同时由于关节软骨覆盖在骨组织表面，软骨的缺损多伴有骨缺损。对于骨软骨缺损，需要修复两种组织，因此间充质干细胞是修复骨软骨组织的较理想的细胞来源。Wakitani等门报告了用体外纯化培

养的自体BMSC掺人I型胶原凝胶修复兔膝关节软骨的大片缺损，术后2周即形成透明软

骨，24周缺损的关节软骨得以修复，但修复的软骨比正常的关节软骨薄，有些区域缺乏软骨蛋白多糖。Yoo等1]将BMSC分离、体外培养、扩增后导入修饰基因，然后将这些遗传修饰的细胞与软骨诱导因子一起注入损伤集中区域，发现这些细胞的靶细胞和生物活性因子到达受损的关节软骨处并逐渐使受损的关节软骨得到恢复。董启榕等1]抽取兔骨髓体外扩增后，与Ⅱ型胶原凝胶载体结合，植入兔关节缺损中，获得透明软骨样修复，修复软骨与周围组织连接良好，认为Ⅱ型胶原作为载体较I型胶原效果好。Wlsh等1切对兔膝关节内侧半月板部分缺损

模型进行修复的研究表明，复合有自体BMSC的I型胶原海绵较单纯I型胶原海绵和骨膜能

更好地促进半月板的愈合，并形成组织学上与正常半月板相似的纤维软骨，但仍会出现关节的

退行性变。BMSC是动物体内软骨组织损伤后的主要修复细胞，不同来源的间充质干细胞修

复软骨缺损的能力不同。Nvo等1]比较不同干细胞对关节软骨缺损的移植修复效果，发现

自体骨髓BMSC成功率为100%，而异体骨髓BMSC成功率仅为31%。

三、软组织修复

Badiavas等1们抽取3例病程超过1年的慢性难愈合创面患者的骨髓，体外培养并纯化

BMSC后回植创面。2周后伤口面积威少，血管的直皮和直皮厚度增加，最后所有患者创面愈

2

第一章骨髓间充质干细胞在骨伤疾病治疗中的应用研究进展

合，真皮重建，组织学显示瘢痕形成减少。耿献辉等1)将SD大鼠BMSC进行体外培养扩增

后，以生长状态良好的BMSC接种于制备好的组织工程化脱细胞真皮支架上，进行体外联合

培养，构建组织工程皮肤。结果体外培养的SD大鼠BMSC生长良好，传代扩增容易，组织工

程化脱细胞真皮基质去细胞完全，BMSC在脱细胞真皮基质中生长良好，可体外构建组织工程

皮肤。闫国和等18]将人羊膜负载BMSC移植到小香猪全厚皮肤缺损创面，术后18~20天脱

痂愈合。Ferrari等19将BMSC经静脉系统注入一侧腓肠肌损伤的动物体内，发现移植

BMSC可以迁移至受损的腓肠肌组织中，修复受损伤的肌肉，而对正常的肌肉则无影响。

四、肌腱修复

临床工作中经常会遇到肌腱的损伤甚至缺损，传统的修复方法存在很多问题，如供源不足、二次损伤、排异反应及修复效果不理想等。随着组织工程的发展，肌腱的修复出现了新的转机。体外发现成纤维细胞和胶原复合体随时间推移而发生收缩，成纤维细胞改变形状和方向，这些改变和细胞增殖、蛋白合成、细胞外基质形成是一致的。鼠间充质干细胞种植于1型胶原凝胶，体外培养后细胞重新排列方向，并且表达长梭形的形态。间充质干细胞数目越多的复合体显示更好地排列及长的梭形细胞核，是收缩的胶原纤维所产生的物理约束力而引起细胞核形态的改变[]。间充质干细胞胶原复合体移植于兔跟腱缺损处，所形成的肌腱检测分析显示生物力学提高、组织结构及肌腱的功能改善，提示间充质干细胞在体内环境可以分化成肌腱细胞，再生出肌腱21]。Yavuzer等22用家兔自体BMSC复合纤维蛋白胶移植于兔跟腱横断

损伤区，结果显示肌腱损伤后即给以腱内BMSC复合纤维蛋白胶治疗可促进肌腱愈合早期组

织形态学及生物力学修复。

五、椎间盘退变的修复

椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IDD)是引起下腰痛的常见病因之一，临床上常见腰椎间盘突出等疾病，严重影响人们的生活质量。当前的治疗大都是保护生物学功能和缓解症状，而不能从病理生理上解除疾病的发病因素，因而常导致原位或邻近椎间盘疾病复发[]。自提出骨髓间充质干细胞概念以来，利用其修复组织损害和促进功能恢复作用的治疗方法成为目前医学领域中引人关注的热点之一。Sakai等21用自体BMSC移植治疗有IDD

的兔模型，分别注射至3个腰段的脊柱椎间盘，与未经过手术的IDD兔作对比，连续观察24

周，通过X线平扫、T2相磁共振、组织学、免疫组化及对基质相关的基因表达的检测得出结

果：注射兔组相对非手术组，退化的椎间盘X线高度恢复91%，磁共振信号强度81%：相对假

手术组分别为67%和60%。这些数据表明，在兔模型中BMSC可有效治疗退化的椎间盘，证

明BMSC可能是治疗退化椎间盘的一种有效方案。Ho等[采用新西兰白鼠下腰段椎间盘

的AP以诱导椎间盘变性，变性进展程度从1~7个月，并注人BMSC,结果早期组BMSC未明

显表现出抵抗退化的作用，晚期组虽然椎间盘高度较低，但无明显退化表现，而且局部的黏多糖数量没有减少，说明BMSC有抵抗白鼠椎间盘晚期退变能力。Zhang等2s用兔做实验，

将BMSC注人退化的椎间盘后，能增加退化椎间盘蛋白聚糖的表达量，他们的数据支持同种异

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体BMSC移植后能存活，并能增加蛋白聚糖表达，支持BMSC移植有治疗IDD的潜力。

Wang等2]对称猴L3~L4、Ls~L6椎间盘摘除术后，随机分组做陶瓷椎间盘、自体髂骨移植融

合及BMSC陶瓷混合融合3种替代治疗，3个月后应用X线、生化测试、组织学分析及组织形

态学，分析其融合及更新状况。结果，BMSC陶瓷混合融合效果最好。Hiyama等[2s]用通过髓

核摘除术制作犬腰IDD模型，手术后4周将BMSC注入退化的椎间盘，随后12个月进行放射

学、组织学、生物化学、免疫组化及RT-PCR分析，结果与对照组比较，注射了BMSC组犬有效

的促进了退化椎间盘的再生，对BMSC FACS和RT-PCR分析表明，相对未注射前的BMSC,

它们从基因水平表达FsL,是具有免疫豁免特点的表型，表明BMSC移植具有维持椎间盘细胞免疫豁免，防止退化的作用。

六、脊髓损伤的修复

Chopp等采用撞击造成大鼠脊髓T,节段损伤，1周后在损伤中心部位注入间充质干细胞，Basso-Beattie-Bresnakan(BBB)评分评价损伤后的神经功能状况，结果发现植入组的情况明显好于对照组。林建华等[]将骨髓间充质干细胞经静脉移植对外伤性截瘫大鼠进行治疗，发现骨髓间充质干细胞表达神经细胞的表型神经元特异烯醇化酶、微管相关蛋白2，并促进神经结构的修复及神经功能的恢复。以上事实说明，植人骨髓间充质干细胞对脊髓损伤引起的运动功能障碍有显著的疗效。Deng等o采用改良Allen法制作恒河猴脊髓冲击损伤模型。再将经bFGF预诱导和丹参酮诱导的第5~10代恒河猴BMSC于损伤2周后注入实验组猴的脊髓损伤区。结果治疗组动物双侧均恢复正常疼痛退缩反射，且恢复至Tarlov2~3级，表明诱导后BMSC移植促进了恒河猴脊髓损伤功能恢复。Vaquero等s1]采用重物打击法制造严重脊髓损伤大鼠截瘫模型，3个月后仍无功能恢复迹象。此时，分别经原造模切口重新切开向

创伤后脊髓空洞注入经双苯酰亚胺标记的BMSC,并以注入等量PBS作为对照组，移植后每

天行为学测试，结果15天即显示明显和递增的运动恢复，直到移植6个月被处死时仍未进入

平台期，BBB评分为(12.8士1.3)分。BMSC移植对脊髓损伤的治疗作用在不同的实验研究中

已得到证实，但其作用机制仍未明确。

七、股骨头缺血性坏死

随着干细胞工程的进展，骨髓间充质干细胞成为治疗股骨头缺血性坏死的重要手段之一。

刘长安等32]用液氮冷冻法造模，24只新西兰大白兔随机分成两组，A组为髓芯减压组，B组为

干细胞移植组。术后每组分别于2、4、6、8周各处死3只动物，做X线及组织学检查。结果2

周时A组钻孔区出现少许炎症细胞，边缘出现较多成骨细胞并有骨组织形成，至8周时，钻孔

区内形成骨髓组织，只在边缘形成骨小梁结构。2周时B组钻孔区有大量的成骨细胞，边缘有

较多骨组织形成。8周时钻孔区内骨小梁成熟，小梁有骨髓组织填充。故认为骨髓间充质干细胞对兔股骨头缺血性坏死有良好的修复作用。Yang等[3]研究表明，经动脉自体骨髓间充质干细胞移植可改善股骨头坏死缺血状态，是治疗缺血性股骨头坏死的有效手段。Asda等[3把家兔分为4组：第1组只注射甲基强的松龙。第2组甲基强的松龙注射2天后在距离

第一章骨髓间充质干细胞在骨伤疾病治疗中的应用研究进展口

大转子基底部2.5cm处钻直径为1.2mm小孔。第3组甲基强的松龙注射2天后，直接注入骨髓腔2mL生理盐水。第4组甲基强的松龙注射2天后直接注入骨髓间充质干细胞。在处理前后进行血清学检测，并行组织苏木精染色等，以细胞周期和胸腺嘧啶摄取能力来分析股骨的细胞增殖能力。结果显示：第1组、第2组和第3组的股骨头坏死发病率分别为72.7%、

70.0%和66.7%。而第4组股骨头坏死发病率为0。第4组血清学检查几乎正常，组织染色等都比其他组少，吸收的胸腺嘧啶显著增加。因此得出结论，直接注射自体骨髓间充质干细胞到

股骨能阻止短期治疗高剂量类固醇诱导的股骨头坏死。C等[3]研究表明，克隆的骨髓间充

质干细胞在移植于小鼠股骨头骨缺损区和皮下、肌肉和肾包膜等异位场所后都能直接形成骨。表明了在体外扩增骨髓间充质干细胞可以作为移植材料以提高骨修复和治疗骨坏死。骨髓间充质干细胞移植治疗股骨头缺血性坏死在临床实际上也取得了可喜的进展。Gangji等[36]研

究了13例(18髋关节受损)第1、第2阶段（根据ARCO骨坏死分期标准）的股骨头坏死患者。

患者中有糖皮质激素治疗引起1例(2髋)和酒精性股骨头坏死1例(2髋)。患者按髋关节受损分两组，一组（对照组）予髓心减压术，另一组（骨髓移植组）做髓心减压术和植人自体骨髓单个核细胞。结果经24个月，在骨髓移植组患者疼痛显著减少，关节症状、Lequesne指数

(P=0.001)和WOMAC指数(P=0.013)都显著减少，而且5年后对照组8髋中有5髋恶化

到了第3阶段。骨髓移植组10髋中只有1髋到了第3阶段，两组之间有着显著的生存差异。

Kim等3]为1例31岁的男性双侧股骨头坏死患者，左侧在髓芯减压后立即行移植骨治疗，右

侧在髓心减压4周后注射自体培养的骨髓间充质干细胞。治疗后1年内CT显示右侧坏死的

股骨头修复改善，而左侧坏死股骨头在吸收了移植骨后继续恶化。Yamasaki等[38]研究表明，骨髓间充质干细胞具有促进血管生成和成骨，能有效防止股骨头坏死恶性发展。Ji等3]治疗87例(103髋部)的股骨头坏死患者，在患者股骨三孔髓芯减压后移植入骨髓间充质干细胞和去钙骨基质。通过治疗前后患者的临床症状、哈里斯指数和放射学检查来评价疗效，结果表明，三孔髓心减压联合移植入骨髓间充质干细胞和去钙骨基质可以修复受损组织、减轻疼痛和改善关节功能，是一种治疗早期股骨头缺血性坏死的有效方法。

八、自体骨髓间充质干细胞骨伤疾病治疗

自体骨髓间充质干细胞骨伤疾病治疗技术，即AOT(autologus osteo therapy)技术，是由美国肌肉、骨骼、脊髓和神经损伤领域的知名专家桑迪诺(Centeno)博士发明的。美国ABC、

CBS等电视台都曾对其技术进行专题访问报道。AOT技术就是通过释放患者自身干细胞的

力量来达到治疗股骨头坏死、骨性关节炎、骨不连、椎间盘突出以及由运动造成的肌腱、韧带和

半月板损伤等骨病的目的。AOT技术为干骨髓间充质干细胞治疗骨伤疾病提供了一条新的

途径。

AOT技术的适应证：①骨折延期愈合及不愈合；②骨坏死（如股骨头坏死期和Ⅱ期）；③剥

脱性骨软骨炎、软骨缺损；④老年骨性关节炎；⑤创伤性关节炎；⑥半月板损伤；⑦肌腱、韧带损伤；⑧椎间盘损伤。

AOT技术的禁忌证：①身体健康较差，合并有高血压、糖尿病、心脏病等器质性病变；②骨

心

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髓成骨能力较差不适宜自体干细胞移植；③有骨肿瘤和凝血功能障碍。

AOT技术的主要特点如下。①自体培养，安全可靠：干细胞来自自体骨髓，干细胞的体外

培养使用患者自体血小板裂解液，不使用任何外来的细胞培养生长因子。这就最大限度地保持干细胞处于体内状态，保持干细胞不产生变异；②程序规范，标准严格：实验室和临床程序正

规完整，严格按照美国国际细胞医疗协会(ICMS)和中国国家中医药管理局的标准进行操作；

③微创，痛苦很小：临床治疗创伤轻微，患者痛苦小，患者不需长期住院，不用陪护；④质量保证，无排异反应：具有严格的干细胞质量检测程序，包括染色体变异的核型检测。由于完全自体，无免疫排异和传染疾病等问题。

AOT技术已经在山东省文登整骨医院成功应用[。2008年1月至2009年6月，桑迪诺

博士曾3次到山东省文登整骨医院洽谈技术合作；山东省文登整骨医院2009年6月由美国桑

迪诺-舒尔茨医学中心引入AOT技术。2009年6月~12月，主要是实验室建设，组建专家团

队和组织技术人员赴美国接受培训；2010年1月~5月，干细胞实验室试运行阶段，建立所有

操作程序的标准SOP;2010年6月，干细胞治疗中心正式开诊，治疗各类骨伤疾病患者，取得

了良好的治疗效果。

综上所述，由于BMSC,具有能够快速扩增和多向分化等特点，使其成为再生医学中一个

非常引人注目的工具。在骨伤科展示了光明的应用前景。随着对BMSC的深入研究，一些现

在难以治愈的疾病，将来有可能采用新的方法得到很好的治疗。但是利用BMSC进行基因治

疗骨、软骨缺损的研究才刚起步，技术手段还不完善，其治疗的安全性、有效性、载体的选择、特定分化因子或抗炎因子的选择与共同修饰的效果、基因转染的方式等问题还需要深入研究和探索。

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···试读结束···