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  • 《动物疫病基因工程疫苗研究与进展》邱昌庆,才学鹏主编|(epub+azw3+mobi+pdf)电子书下载

    图书名称:《动物疫病基因工程疫苗研究与进展》【作者】邱昌庆,才学鹏主编【页数】455【出版社】北京:中国农业出版社,2005.12【ISBN号】7-109-10524-5【分类】基因-遗传工程-应用-兽疫-疫苗-文集【参考文献】邱昌庆,才学鹏主编.动物疫病基因工程疫苗研究与进展.北京:中国农业出版社,2005.12.图书目录:《动物疫病基因工程疫苗研究与进展》内容提要:“十五”国家高技术研究发展计划(863计划)课题研究论文汇编:本书分上、下两篇。上篇为文献综述,共17篇,分别描述了国内外相关动物疫病防治技术研究的最新进展;下篇为研究报告,共40篇,详细记录了不同分子疫苗或诊断技术的研究过程和情况,附有大量试验图片。《动物疫病基因工程疫苗研究与进展》内容试读料架西安话上篇文献综述骨事出高外院一话雷酒中(目离率原海禄本干山合中头人点来的形歌有伯实结白州全卖发高居面世落话的净春能幸剂1出好,布南数女液元微然55出从不代孩苗致链版数动卧,夜近的便新家行出出管家用司的的的的白败,秋因胰时己际购出许不边街贸张税日面安由,下上千生气是花费品天箱的平用手如#初出名甲均外安潮海明大海外装家角的的夹装口出储水首器京时中批期发大亚真雪数亚条《A)知理解通事年年保香天阳量常由赛大安2国头本容味水回邮曜空兰不河味,有香号福的西8(V组0士好转5A通辛的超台2者的4藤代衣中道单水每诗的。答白球孕V行西向,名州氣动心可名古太过流汤路出天字米还省州联资品法白科的中流尘师0的头璃弹数中的秋员序白而休出供表全的语要子荧的式课安通场中小健余性政勿只客在眼官试特平政黄的以身生年言说:国材为出下烟百奇计达联利来印特用味票出的浙子”2位日室定海子;时场场记水施女2动物疫病基因工程疫苗研究与进展口蹄疫分子疫苗研究展望卢曾军曹轶梅刘在新谢庆阁(中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室,甘肃兰州730046)摘要:传统疫苗(主要指灭活疫苗)在口蹄疫的防制中起到了巨大的作用,然而由于大量的增殖自然病毒,使得在疫苗的生产和使用过程中存在许多风险。目前,尽管传统灭活疫苗在口蹄疫防制中仍然具有不可替代的作用,但人们在新型分子疫苗的研究方面也同样给予了足够的重视,试图通过基因工程技术来降低口蹄疫疫苗生产和应用中存在的诸多风险。分子疫苗的研究尽管在合成肽疫苗和重组载体疫苗方面取得了突破性的进展,但亦然是任重道远。关键词:口蹄疫,分子疫苗口蹄疫(FM⑩)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的偶蹄动物的一种急性高度传染性疫病,被国际兽疫局(OIE)列为A类动物传染病之首。由于本病传播迅速,感染率高且难以控制和消灭,暴发此病后,会对社会经济和政治造成严重影响,因此各国政府对此病的防制都极为重视,高效、安全、广谱的口蹄疫疫苗一直是世界各国研究的热点。从20世纪初就已经开始了口蹄疫疫苗的研究,l927年Berli进行了口蹄疫病毒弱毒疫苗的研究,随后许多研究者也进行病毒致弱的研究,但由于口蹄疫弱毒疫苗毒力不稳定,而且弱毒疫苗的应用不利于进行感染动物与免疫动物的鉴别诊断,因此,现在已经停止使用弱毒疫苗。实际能够达到应用水平的口蹄疫灭活疫苗最早产生于1937年,由Waldma等首先研制出口蹄疫组织灭活疫苗。随后的组织培养技术的发展,使口蹄疫疫苗真正可以大规模地生产和应用12)。口蹄疫常规灭活疫苗,常用的灭活剂有甲醛、乙酰乙烯亚胺(AEI)、二乙烯亚胺(BE)、阝-丙内酯等。佐剂有氢氧化铝胶、皂素、弗氏不完全佐剂、油包水乳剂等。在疫苗中添加分枝菌细胞壁的可溶性部分、合成硫辛酰胺、Avridie等作佐剂生产FMDV油佐剂灭活苗,可以降低抗原的用量,同时增强FMDV的细胞免疫应答)。随着病毒浓缩和纯化技术的研究和在生产中的应用,口蹄疫高效疫苗和多价疫苗成为未来灭活疫苗研制的发展方向。灭活疫苗以细胞培养的全病毒经提纯灭活后作抗原,因而具有良好的免疫原性,免疫动物后产生良好的体液免疫,并伴随有细胞免疫应答,具有良好的保护作用。缺点是,灭活疫苗的热稳定性差,要求低温保存,免疫持续期短,抗病毒谱有限,有造成持基金项目:国家高技术研究发展计划(863计划)课题(编号:2003AA241110)上篇文献综述3续感染的危险性[幻,由于疫苗中带有痕量的非结构蛋白成分,因而不利于区分注苗动物和自然感染动物,同时存在病毒灭活不彻底而散毒的可能性)。尽管传统疫苗在全世界口蹄疫的防制中取得了很大的成功,但从20世纪70年代开始,口蹄疫病毒新型疫苗的研究就已经开始,到目前为止,在口蹄疫研究中仍然占有很重要的地位。新型疫苗的研究热情未减,这主要是因为,新型疫苗与传统疫苗相比,在制造过程中不动用原始活毒,减少了病毒扩散的机会,因而更安全;新型疫苗研究中考虑到了口蹄疫鉴别诊断的需要,有利于建立鉴别免疫动物与自然感染动物的方法。口蹄疫新型疫苗主要包括以下几种:最先研究的是蛋白质、蛋白片段和病毒亚单位疫苗,其抗原主要来自细菌、杆状病毒、甚至植物表达系统中表达的病毒抗原;随后又发展了合成肽疫苗、复制性和非复制性载体疫苗、基因工程致弱的弱毒疫苗和DNA疫苗,但至今还没有一种基因工程疫苗问世。1基因缺失标记疫苗在口蹄疫病毒感染性cDNA克隆的基础上,可以通过缺失一些重要的毒力基因,研制基因工程致弱毒,通过适当的分子标记,就有利于建立鉴别疫苗免疫动物与自然感染动物的诊断方法。用这种方法生产的弱毒疫苗,可以同时刺激机体全面地抗病毒免疫反应,理论上讲,免疫效果应当优于灭活疫苗。也可以用基因工程致弱的标记弱毒来生产灭活疫苗,以增加生产过程中的安全性,又可以提供鉴别诊断的方法。研究表明,口蹄疫病毒的oy(C)片段可能与病毒的毒力有关,但含有2个核苷酸的oy(C)的基因工程毒对小鼠同样具有毒力,在脑心肌炎病毒的研究表明,短的oly(C)仅对毒力有轻微的减弱。口蹄疫病毒的前导蛋白L具有类似于木瓜蛋白酶的活性,可以催化自身同聚蛋白的裂解分离,在细胞内可以裂解真核翻译起始因子elIF-4G,从而阻断了宿主细胞从mRNA5'端开始的蛋白翻译合成(ca-deedet),而病毒RNA的翻译(ca-ideedet).却不受影响。缺失L基因的A12型基因工程毒可以在BHK-21细胞内增殖,但比野毒株要慢,对乳鼠的致病力也减弱,通过气源性感染牛发现毒力的确减弱,致弱毒在肺组织和表皮组织没有大面积的扩散,5个PFU的牛体传代野毒即可引起牛发病,而725000P℉U的致弱毒不能使攻击牛产生任何的临床症状,10?~108P℉U的致弱毒通过肌肉注射对牛无致病性。在猪体试验也得到了类似的结果。用缺失L蛋白的基因工程致弱毒制造灭活疫苗对牛和猪可产生部分的保护作用)。突出于衣壳表面的G一H环是口蹄疫病毒粒子表面结构的一个显著特征,尽管这个环具有高度可变的特性,但位于最顶端的精氨酸-甘氨酸~天冬氨酸(RGD)三肽序列却具有高度的保守性。RGD序列是病毒细胞受体结合的重要位点,也是中和抗体结合的重要位点。存在RGD序列变异突变株病毒,但这种突变不稳定,很容易发生回复突变。通过定点突变的方法直接缺失RGD序列而产生的感染性cDNA,通过特殊的电穿孔方法转染BHK~21细胞,可以产生大量的缺失RGD序列的病毒粒子,通过与单克隆抗体结合试验证明,这种缺失对病毒的抗原结构破坏很小。缺失病毒在BHK~21细胞和小4动物疫病基因工程疫苗研究与进展鼠体内试验证明其毒力和感染性都不会出现反复,与其原始野毒相比,毒力下降为原来的0.0001%。将这种缺失毒接种猪蹄部的敏感部位,野毒攻击猪可以产生明显的临床症状,而缺失毒攻击猪没有出现任何临床症状,也没有病毒的增殖,2C、3AB、3C血清抗体检测为阴性。用这种RGD缺失毒来免疫牛甚至产生了比灭活疫苗更好的免疫保护作用(McKea等,1995)。I.eiert等(1997)研究证实,RGD序列在病毒感染过程中的作用,RGD内部发生突变的感染性cDNA不能通过一般的方法转染BHK-21细胞产生病毒粒子,但其两侧的序列发生突变则可以转染BHK-21产生明显的细胞病变,说明RGD两侧序列具高度的灵活性和可变性,这也是FMDV可识别多种细胞受体、宿主范围宽广的-一个原因。FMDV可以利用不同的细胞受体而进人细胞,有些是RGD序列依赖性的,有些则不是,如果能够找到RGD缺失病毒的敏感细胞系,则可以通过一般的方法大量地增殖病毒,用于免疫研究。非结构蛋白3A的变异与FMDV对牛致病力减弱有关,但1997年中国台湾猪流行毒3A部分在相同位置也有缺失。C型克隆毒C-S8c1在豚鼠体内的适应性传代,发现在结构蛋白(VP1)与非结构蛋白(2C和3A)编码区均有一个氨基酸的改变,而3A区Q44→R个氨基酸的替换就足以对豚鼠产生致病力,这些变化可能与宿主嗜性的改变有关8]。FMDV在鸡胚传代过程中也发现有3A的缺失。对小RNA病毒科病毒3A蛋白功能的研究表明,3A蛋白可能与病毒RNA的合成有关,在3A蛋白的53~81位氨基酸形成一个疏水性域,在细胞内可能是3B蛋白的膜锚,3AB具有RNA结合活性,与前体蛋白3CD一起形成个核蛋白复合体,参与病毒RNA的合成。在小RNA病毒科中,不同属的病毒其3A的长度不同,3B的拷贝数也不同,这些现象有什么生物学意义?通过反向遗传学的方法,构建含有不同长度3A基因和不同拷贝数3B基因的感染性克隆,研究不同基因工程毒的生物学特点,有可能揭示3A和3B的精确生物学意义,同时也为研究基因工程弱毒疫苗提供可靠的数据。至今国内外还没有口蹄疫分子标记疫苗的研究报道。研究标记疫苗的目的在于鉴别疫苗免疫动物与自然感染动物,消除隐性感染,避免口蹄疫防制中大量扑杀动物所造成的巨大经济损失。通过感染性克隆来研究标记灭活疫苗和弱毒疫苗,是非常好的技术路线。标记疫苗应该比田间野毒多或者少一种免疫原蛋白或多肽。例如,经过抗原纯化的高效FMD灭活疫苗不含有3ABC抗原,用这种疫苗免疫的动物,不会产生抗3ABC抗体,而FMDV在感染动物体内复制的过程中会产生3ABC抗体,这样,通过检测动物体内的3ABC抗体就可鉴别疫苗免疫与自然感染动物。通过基因工程的方法缺失3A或3B中某一肽段,这样研制的基因缺失标记疫苗,病毒抗原可以不经过严格的纯化过程,可以通过建立检测缺失肽段抗体的方法来区别疫苗免疫动物和自然感染动物。所选择的这种缺失肽段必须具有很好的免疫原性,在自然感染动物体内一定要能够检测到其抗体。通过嵌合表达其他一些病毒的抗原肽段和易于检测的生物分子,也可研制标记疫苗。目前已经建立的口蹄疫病毒的感染性克隆有A12]、O1K1o、OH/99(其基因组序列与O/Tai97非常接近)11以及OH/99的细胞传代毒感染性克隆(方先珍,2004)。有了感染性克隆这个技术平台,就可以开展基因缺失标记疫苗的研究,这其中可包括基因缺失上篇文献综述5弱毒疫苗和基因缺失灭活疫苗。2基因工程活载体疫苗的研究已报道的活病毒载体研究包括痘病毒(oxviru)、腺病毒(adeoviru)、疱疹病毒(hereviru)、腺联病毒(adeo-aociatedviru)、反转录病毒(retroviru)、甲病毒(alhaviru)、脊髓灰质炎病毒(olioviru)和门戈病毒(Megoviru)、登革病毒(Degueviru)、流感病毒(ifluezaviru)、水泡性膜炎病毒(veiculartomatitivi-u,VSV)。活病毒载体可以分为可复制型和复制缺陷性两类。在口蹄疫活载体疫苗研究中应用的有痘病毒、腺病毒、疱疹病毒载体、甲病毒等。活载体疫苗主要的优点是可以将外源抗原基因有效地导入机体,而不需要动用原始活毒,因而相对安全。所用的病毒载体必须是致弱的(可以复制,但不致病)或者是复制缺陷性的,如果能用疫苗株弱毒研制活病毒载体则具有更高的安全性。对可复制的活载体疫苗来说,在要求疫苗效力好的同时,更应强调其生物安全性,需要在安全性和效力之间寻求平衡。活载体疫苗的另一个优点是可以同时插几种不同的外源抗原基因,生产多价疫苗,一针多防,从而降低疫苗生产的成本。活载体疫苗的最大缺点是宿主会产生强大的针对病毒载体的免疫反应,如果机体已经存在对病毒载体的免疫力,那么初次免疫会受到影响,再次免疫后会邀起机体的强大的排斥反应。这一缺点可以通过采用不同的免疫策略来克服。例如,初次免疫采用载体疫苗,再次免疫可用DNA疫苗或蛋白质亚单位疫苗,或者采用不同的病毒载体疫苗进行免疫。2.1痘病毒载体疫苗痘病毒是大的双股DNA病毒,线型DNA长约130~375k,基因组中含有许多非必需区,至少可以插人25000的外源DNA片段。已经有一种表达人疟原虫7种不同的抗原蛋白的重组痘病毒疫苗进入了临床试验。NYVAC株痘病毒是来自来哥本哈根疫苗株的高度致弱毒,不能够在多数人类细胞系中增殖,在动物体内也表现出高度致弱的特征。ALVAC株是来自金丝雀的疫苗株痘病毒,广泛用作痘病毒载体,只限于在禽类中复制,而不能在哺乳动物体内和细胞中增殖。这两株非复制性痘病毒载体都能用于表达外源基因,刺激机体产生保护性的免疫反应。MVA是另一株非复制型痘病毒载体,是一株安全的疫苗株小痘病毒,是在初代鸡胚成纤维细胞中传代570多代次后形成的,基因组中有多处缺失,在人体内试验的结果没有明显的危险性,机体对这一载体的免疫反应没有复制型病毒强,用其研制的流感、副流感重组疫苗具有很好的效力。另有禽痘病毒、猪痘病毒、山羊痘病毒、浣熊痘病毒活载体的研制和应用。目前应用痘病毒作载体研究的重组活载体疫苗有:人艾滋病、狂犬病、伪狂犬病、禽流感、牛瘟、猪瘟、马立克氏病、新城疫等的重组痘病毒疫苗,均有不同程度的保护作用。利用痘病毒活载体研究口蹄疫病毒载体疫苗的报道并不多,Aram等(I995)即利用痘苗病毒进行了口蹄疫病毒空衣壳的表达2。Saz-Parra等(l998)构建了带有蹄6动物疫病基因工程疫苗研究与进展疫病毒结构蛋白P1和VP1基因的重组痘苗病毒,免疫豚鼠后可产生抗FMDV的ELISA抗体和细胞免疫反应[1)。Beritei(20OO)构建含FMDVP1基因的重组痘苗病毒,免疫小鼠后可产高滴度的中和抗体,并具很好的免疫保护作用)。然而,口蹄疫病毒重组痘苗病毒载体疫苗在本动物体内的免疫效力试验还未见报道。2.2腺病毒载体疫苗腺病毒是一种无囊膜的双股DNA病毒,基因组大小约为30~40k。腺病毒种类很多。腺病毒感染后的临床症状也比较轻微。人的4和7型腺病毒弱毒疫苗曾被美国军方用于免疫土兵,以预防呼吸道疾病,也常应用腺病毒的弱毒疫苗免疫家养动物来预防一些腺病毒相关疾病。这些实际应用的成功,鼓励了人们开发应用腺病毒载体疫苗的信心。腺病毒载体疫苗有许多优点:首先是重组病毒载体构建相对容易,目前已有许多商品化的腺病毒载体系统;二是重组腺病毒可以达到很高的滴度,可以通过肌肉、鼻腔或口服进行免疫;三是重组腺病毒可以感染很多类型的分裂或静止期细胞,进入细胞的效率很高。通过基因工程的方法可以构建3种类型的重组腺病毒:一种是可复制的重组腺病毒;二是不需要辅助病毒的复制缺陷型的重组腺病毒,需要有特定的包装细胞系;三是需要辅助病毒的复制缺陷型的重组腺病毒。缺失E1/E3区的复制缺陷型的重组腺病毒可以插入约7.5k的外源基因片段;外源基因插入E3和E4缺失区可以产生可复制的重组腺病毒,插入的外源基因可达5~6k。在增殖E1缺失的重组体的时候存在一个问题,是容易通过重组产生一定比例的可复制的腺病毒,现在已经研制出一种包装细胞可以解决这一问题。尽管可复制腺病毒疫苗应用已有许多年了,但已经发现了Ad4弱毒在人群中水平传播的例子。不需要辅助病毒的复制缺陷型重组腺病毒在应用中可能更安全,但复制缺陷型的重组腺病毒的免疫效果却没有可复制的重组腺病毒好,表达伪狂犬病毒(PRV)gD糖蛋白的复制缺陷型重组腺病毒的保护剂量至少是可复制型重组腺病毒的250倍。也有许多利用本种属动物的腺病毒构建可复制重组腺病毒疫苗的研究:如用牛的腺病毒(BAV-3)表达牛疱疹病毒1型(BHV1)gD糖蛋白可以保护小牛不受BHV1的感染;禽腺病毒(FAV-10)-传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2重组体可以保护鸡不受BDV的感染;猪3型腺病毒(PAV-3)和绵羊腺病毒载体疫苗的研究也有报道。口蹄疫腺病毒活载体疫苗的研究比较多,已报道的研究均是以Ad5型腺病毒为载体,一般缺失腺病毒的E1和E3编码区,有些载体也缺失了E4编码区。Saz-Parra等(1999)同样也构建了表达口蹄疫病毒P1编码区的复制缺陷型重组腺病毒,在通过鼻咽部和皮下两种路径免疫试验,证明通过两次免疫牛可产生部分的保护性免疫反应5]。Mayr等(1999;2001)构建了含有FMDVP1-2A-3C基因的A24/A12嵌合型重组腺病毒,同时构建了3C突变型和野生型两株重腺病毒,只有3C野生型重组腺病毒能够将聚蛋白P1裂解为VP0、VP1和VP3及刺激动物产生高水平的中和抗体,说明3C蛋白酶对衣壳的组装是必需的16,1)。这种重组腺病毒一次免疫猪体后7、14和42d用同型病毒攻击,具有很好的保护作用[町。兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室也构建了表达O型FMDV空衣壳的复制缺陷型重组腺病毒,在豚鼠和猪体内均取得了很好的免疫效果;初步的猪体免疫试验,可使3/4的免疫猪免受强毒攻击感染(未发表资料)。国内外对口蹄···试读结束···...

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    2022-10-05 世界史 epub 网盘 世界史epub

  • 《世界500强内容演示制作方法与说服技巧》(日)前田镰利著;范丹译|(epub+azw3+mobi+pdf)电子书下载

    图书名称:《世界500强内容演示制作方法与说服技巧》【作者】(日)前田镰利著;范丹译【丛书名】世界500强内部演示制作方法与说服技巧【页数】157【出版社】北京时代华文书局,2017.01【ISBN号】7-5699-1204-3【价格】36.00【分类】演讲-语言艺术【参考文献】(日)前田镰利著;范丹译.世界500强内容演示制作方法与说服技巧.北京时代华文书局,2017.01.图书目录:说服技巧》内容提要:本书共分为六章,其主要内容包括:演示资料必须“简洁逻辑”不要让决策者“阅读”演示资料将图表加工至能“瞬间”理解的程度只使用能帮助决策者进行理解的“图像”等。《世界500强内容演示制作方法与说服技巧》内容试读第1章演示资料必须“简洁逻辑”Leo将幻灯片缩减至“5~9张”企业演示播放时间控制在“3分钟”内制作企业演示时,最重要的是什么?就是站在决策者的立场来进行思考,如何才能让他们简明易懂地理解并接受提案内容呢?必须彻底想清楚这一点,然后围绕它做必要的准备,不做任何会妨碍它的事。这就是企业演示最关键的要点。那么最容易让决策者产生犹豫的事又是什么呢?就是浪费时间。决策者必然是很忙的,需要在有限的会议时间内做出多个决策。所以他们最讨厌的就是拖沓和不得要领的演示。因此将企业演示播放时间控制在3分钟之内是基本要求,最长也不能超过5分钟。无论是怎样的企划,都能够在3~5分钟内阐明提案核心并具有说服力。或者说,倘若不能在此时间内完成,反而会被认为没有抓住提案的重点。当然,演示结束后往往还要面对决策者的质疑,需要对此进行补充说明,或者围绕提案是否可行进行讨论。这一流程则不包括在“3~5分钟”之内。002世界500强内部演示制作方法与说服技巧有时,演示结束后还需要较长的讨论时间,这没什么问题。或者说在此时进一步讨论有利于提高决策者做出决断的质量。为了确保这一时间,更应当将演示播放本身简明扼要地控制在3~5分钟以内。那么究竟要怎么做呢?很简单,就是缩减演示资料的幻灯片数量。有人总是觉得“这也要说明,那也要说明…”于是准备20到30张幻灯片。这当然无法在3~5分钟内结束,因为演示是根据资料来推进的,或者说资料就是演示的脚本。如果脚本分量过多,则自然会导致演示过长。相反,如果能创造简洁的脚本,则能有效缩短演示播放时间。图1-1除封面和过渡幻灯片之外,正文为5~9张1234封面过渡幻灯片正文幻灯片①正文幻灯片②5678正文幻灯片③过渡幻灯片正文幻灯片④正文幻灯片⑤9附件过渡幻灯片正文幻灯片⑥(补充资料)正文演示资料必须“简洁逻辑”003因此必须将演示资料控制在59张以内(图1-1)。在这“5~9张”中,不包括封面、目录和过渡幻灯片,只要正文幻灯片控制在5~9张就可以。在注意该原则的基础上提炼内容,让演示播放务必在3~5分钟内结束。超过“5~9张”就是重点不明的演示将幻灯片控制在5~9张之内,不仅有缩短演示播放的效果,更重要的是一旦幻灯片张数超过5~9张,就很容易成为重点不明的演示。该法则是源于美国认知心理学家乔治·米勒所提出的“魔法数字(MagicalNumer)”。米勒发现人类瞬间能记住的情报量极限是“7±2”。该“7±2”被命名为魔法数字。魔法数字被广泛运用于各领域。比如电话号码之所以会以“OOO·OOO·OOOO”的方式来隔开,就是因为“oooooooooo”的显示方式会让人很难记住数字,所以通过连字符,将一个信息的集合分解为“7±2”的组合。企业演示一样。幻灯片的数量一旦超过“7±2”,决策者就很难理解演示内容。提案者由于多次检查讨论提案内容,当然能正确掌握20~30张的幻灯片内容,但对于决策者来说这些都是初次接触的情报。无论多优秀的人,只要幻灯片张数超过“7±2”,就不可能当场理解其内容。因此请将幻灯片控制在5~9张,这才是“一次通过”的制胜法则。004世界500强内部演示制作方法与说服技巧但不能为了将数量压缩至5~9张而强行在每张幻灯片内塞过多信息。比如一张幻灯片包含2个图表的话,也会让对方难以理解幻灯片的内容。每1张幻灯片必须尽可能简单,这是铁则。所以在必要的情况下,即使增加张数也要保证一张幻灯片只包含一个图表。首先,以5~9张为目标来整理情报。如果确实难以压缩的话,请追加幻灯片。演示资料必须“简洁逻辑”005Leo企业演示资料由2“4个部分”构成0掌握企业演示资料的整体构成这一节要说明的是企业演示的整体构成。请看【图2-1】。基本上,企业演示由“封面”“过渡幻灯片”“正文幻灯片”和“附件(补充资料)”4个部分组成。而“正文幻灯片”则由说明“现状报告‘课题’及其‘原因’”“提案‘解决对策’及其‘效果’”的幻灯片组成。所有企业演示都可以遵循这一规律。接下来将介绍其各自的用途,首先则要掌握其整体构成。图2-1事企业演示资料的整体构成1.封面2.过渡幻灯片3.正文幻灯片(5~9张)①现状报告“课题”及其“原因”②提案“解决对策”及其“效果”4.附件(补充资料)006世界500强内部演示制作方法与说服技巧···试读结束···...

    2022-07-28 说服技巧 演示视频 说服技巧 演示图

  • 播文案方法-高级选题-爆款文案,提高5秒完播,快速写高赞金句+爆款文案|百度网盘下载

    播文案方法介绍:01课程介绍-你会学到什么?.m402如何找到拍不完的选题(挖矿).m403把平庸选题优化成爆款选题(冶炼).m404怎样把选题快速写成爆款文案(锻造).m405如何让观点一句顶1W句(开刃).m406如何用内容打造个人IP(刀鞘).m407加餐课-1让用户为内容买单-马斯洛.m4...

    2022-06-07 爆款文案文案 《爆款文案》

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    2022-05-25 Fffgti

  • 喷泉公园:情感美女导师教你

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    2022-05-25 Fffgti

  • 《如何讲话有逻辑怎样说服有力量》郎世荣pdf高清版|百度网盘下载

    编辑评论:如何讲逻辑,如何说服强大的郎世荣df由郎世荣撰写,详细介绍了沟通对人的生活和工作的影响,以及如何用逻辑说服他人成为处理日常生活问题的必要技能之一。如何讲逻辑,如何说服强大的郎世荣df预览《如何讲话有逻辑怎样说服有力量》的推荐理由只有充分了解说话的方式,掌握说话的艺术,才能在社会、职场、家庭,双方如鱼得水,加快成功步伐,过上无悔的人生.这本书详细介绍了沟通对人们生活和工作的影响。如何在逻辑上说服他人,是处理日常生活问题的能力之一。有趣实用的沟通方式,为80后和90后量身打造,清新靓丽。娴熟的语言和技巧、常规的惊喜、终生的训练和启发性的思维帮助您成为每个场合的焦点。教你如何掌握精准表达。只有用精确的方式、精确的语言、精确的对象来表达,才能成为有效的表达、成功的表达。本书通过通俗易懂的例子和小故事,通俗易懂地解释成功社交的秘诀,告诉你如何在不同的情况下与不同的人打交道和交朋友,让你轻松成为一个会说话和会面的人。能聊天,能做人的社交达人。你不仅可以欣赏它的精彩,还可以从中找到自我提升的途径和途径运用精妙诙谐的谚语,经典的成功案例,理论联系实际,一步一步详细讲解,会给读者朋友带来有益的收获!文件目录/k41.et共享/如何讲话有逻辑.怎样说服有力量|├──[如何讲话有逻辑.怎样说服有力量].郎世荣.扫描版.df53.0MB...

    2023-01-17

  • 才是练出来的pdf电子书|百度网盘下载

    编辑评论:良好的才是一本教你如何以高情商说话的书。专门针对不敢说话、不会说话、不擅长说话的人,帮助你熟练而自信地回答别人的演讲。本站提供好口才df电子书下载!良好的才是实践的df介绍在当今社会,人际关系往往是决定性的力量。如果你不会说话,你可能得不到别人的认可和喜欢,没有人会与你合作,也没有人会给你在职场上的机会,让你承担更大的责任。本书第一部分介绍了良好口才的基本思想和注意事项,称为“口才情商”。下一部分将帮助读者重点学习口才在职场、销售、生活、管理等各个层面的实用技巧。每个部分都设置了相应的“情境训练”内容。书末还介绍了“成功口才”的15种训练方法。口才好是df练习的亮点如何接近陌生人?如何与熟人建立联系?如何有效说服对方?如何把好话放在对方心里?说话时如何微笑?如何用言语来鼓舞士气?如何用文字化敌为友?如何通过演讲赢得支持?我如何学习如何说得好?我如何回应别人的赞美?我如何回应他人的批评?如何化批评为表扬?口才好是练就的df目录口才与情商第一部分Leo1的气场对了,我就不会腻了Poit1不顾感情很烦人Poit2为什么语言会痛第3点不合适,不合适Poit4气场不好,常言非议放松警惕的5点技巧Poit6说话不礼貌是可耻的Poit7善待人,用心沟通Leo2磁铁般的表现力沟通前的Poit1,增强自信心Poit2增加认同感,话要互动说出来Poit3不仅互动,而且生动Poit4诉求是语言的魅力Poit5表扬应该表扬到“点”Poit6懂得一点幽默,少一点沉默Poit7笑话可以为生活增添乐趣Poit8的表达技巧让对方胃口大开Leo3巧妙包装,提高语言的“情商”Poit1良好的观察力是对话的先决条件Poit2学习方法,忠告可恶Poit3先表扬后批评Poit4让对方觉得你在想他Poit5下着小雨,不要失礼Poit6拒绝他人时幽默的力量Poit7顺流推船,阻力小Leo4更有意义,更少麻烦Poit1把握尺度,留出空间Poit2煽动是很多人言论的恶习Poit3说话灵活,避免言语Poit4是可以理解的,语言是适当的混淆Poit5增加弯曲度,如果你说它弱的话第6点咄咄逼人会造成不好的印象Poit7霸气会激怒别人Poit8不宜与陌生人过多交谈Leo5一定要说好听好Poit1沉默是金,让对方多说话Poit2用心聆听,收获更多Poit3放下架子听真话Poit4仔细听,不要自言自语Poit5仔细聆听“泛音”Poit6抛砖引玉Poit7学会倾听别人的抱怨成功战斗的下一章第6课第一次见面,可以和大家聊天职场之上的第7课,完美表达自己Leo8的销售暴涨技巧Leo9的说服力让全世界都听你的安排Leo10给你一个团队,你如何说服大家口才好是df评论才是社会需要,也是事业需要。不会说话的人,无疑是个失败者。——林肯说服是得到你想要的东西的惊人艺术。——戴夫·拉卡尼当一个人开口问的时候,他心里已经准备了两种答案。因此,期望给他任何一个答案。——三毛...

    2022-05-15 情商低一定不好吗 不合适高情商回复

  • 量价分析创始人威科夫的盘解读方法免费版|百度网盘下载

    编辑评论:Wyckoff'HadicaIterretatioMethod,theFouderofVolumeadPriceAalyidf是一本关于市场分析的书。读完本书,读者可以成为能看穿内幕的量价分析专家,诀窍在于投资自己。量价分析df内容每次交易时,我们都会面临这样一个问题:“下一个价格是多少?”量价分析将提供答案。交易中只有两个重要指标。一是价格,二是数量。如果我们孤立地看待这两个指标,我们不会得到太多信息,但是当这两种力量结合在一起时,就会产生非常强大的分析。量价分析之父理查德·威科夫多次采访杰西·利弗莫尔和摩根大通,发现这些大师都有一个共同点:使用市场大盘作为投资决策基于价格、数量、时间和趋势去发现最基本的供求规律。他们都是残障阅读的倡导者。本书阐述了RichardWyckoff分析法的精髓,系统地介绍了量价分析法的各个方面,并以通俗易懂的方式解释了其中的常识和逻辑,包括对量价分析法的分析数量和价格分析。首要原则、市场如何被操纵、需要注意的重要烛台形态、支撑位和阻力位、动态趋势和趋势线、价量分布分析,所有这些都建立了完整的量价分析。本书从内部人士(做市商)的角度撰写,解释了内部人士行为的轨迹,以及为什么量价分析是一种帮助您真正了解市场内部情况的方法。作者帮助您深入了解他们的行为,看穿他们的伎俩,解读市场信号,跟随他们的行动,买时买,卖时卖,成为内部人士并从市场群体中获利。阅读这本书,您将成为一个自信而坚定的交易者,摆脱情绪化交易和压力。您将因为一个简单的原因享受您的交易生涯:通过基本逻辑和量价分析的力量,您知道未来市场将走向何方。量价分析df作者信息AaCulli是一名货币、大宗商品和股票交易员,她交易过从期权和期货到股票和大宗商品的各种金融工具,并定期为英国和国际出版物撰写有关各种主题的金融分析文章。作者第一次接触量价分析是在《星期日泰晤士报》的一篇报道中,讲述了一位从金融交易中发了财的交易员正在招收学生学习他的方法。这个人赶走了大银行派来偷师的人,笔者有幸被选入培训。为期2周的培训,被作者视为交易生涯乃至人生中的重要事件。《股票操作员回忆录》是这门课的必读内容,其中一个重要信息是金融市场总是以各种方式被操纵,而判断价格走势是真是假的方法就是使用交易量。音量无法隐藏,每个人都可以看到。本课程开启了作者量价分析的学习探索之旅。作者进一步研究了量价分析领域的大师们,研究了他们的作品,尤其是“量价分析之父”理查德·威科夫的作品,并将量价分析应用到交易和投资方法中。每个市场都成功交易。同时,作者致力于将金融市场中复杂的话题和概念以清晰、简单的方式解释给投资者。着有《量价分析》、《外汇交易导论》、《外汇交易的三维分析方法》、《揭秘二元期权》等书籍,这些书籍在美国各类别网站排名前列其中,《量价分析》被美英网站读者评为该主题的好书。量价分析df章节信息第1章:交易中没有新内容第2章:为什么数量很重要第3章:合理的价格第4章:量价分析的基本原理第5章:量价分析的全球视角第六章:结合K线图的量价分析第7章:支撑和阻力第8章:动态趋势和趋势线第9章:价量分布分析(VAP)第10章:量价分析示例第11章:综合应用第12章:量价分析的新发展量价分析五项功能第一原则:我们在分析中只看一件事:价格是否由成交量确认,或者是否有异常的成交量和价格。五个核心概念:积累、分配、测试、卖峰、买峰。内部人士通过操纵市场情绪来接管市场,他们的目标始终是通过以批发价购买并以零售价出售来获利。K线图:结合分析实体的水平、阴影线的长度、K线图(射门十字线、锤线、长腿十字线、吊人线)和交易的意义体积。支撑位和阻力位:支撑位和阻力位是趋势的解决者。趋势从这里产生并最终突破这个区域,这是决定是否开仓、管理仓位或平仓并退出的关键信号。动态趋势:动态趋势线与量价分析相结合,让您可以在趋势开始时而不是在趋势结束时进行交易。...

    2022-05-13 在技术分析中 如何寻找价格阻力位和支撑位

  • 怎样有逻辑地说服他人pdf电子书|百度网盘下载

    编辑评论:如何在逻辑上说服别人df电子书由作者高德撰写,他可以通过了解人类心理和思维和人际处理的研究来提高你的说服力。很有力的文章,很有用。财富的真正秘密钱总是在最底层的人手中进进出出,而永远在最顶层的人的口袋里。不同的雪球滚下山,也有一些基本条件。例如,有两个雪球,一个大一个小。一个大雪球体积大,在同样的速度下可以滚动更大的面积;而小雪球体积小,同速滚动的面积也小。这就是起始条件的不同。假设一块地面上的雪是恒定的,那么大雪球可以变得非常大,因为它不断增加面积,吸收了大部分的雪;而小雪球可以吸收的雪很少。最后你会发现,当它们到达终点时,两个雪球之间的体积差异变大了。前者是富人,或者是会赚钱的人,后者是穷人——包括那些甚至会失去一座金山的人。这就是富人和穷人的“雪球效应”。在经济学中,这通常被称为“收益递增定律”。换句话说,我们也可以称之为“马太效应”,当这种条件差异越来越普遍时,富人越富,穷人越穷。阶级分化背后的秘密对于社会阶层的划分,即使是众所周知的金字塔结构——正如社会精英慷慨地告诉你的那样,通常是这样的:底层是大多数普通人(劳动者);中间是经理(精英);上层是少数领导人物(统治者)。在我看来,这个层次结构可以进一步细分为四个层次。顶层和底层的构成是不变的,它们是洗脑的两个组成部分,一个是洗脑的来源,一个是洗脑的接受者类别。中间的精英是主要由两个层次组成,一个是中产阶级,他们凭借自己的知识和为上层阶级打工赚了很多钱,也被洗脑了;另一个是负责洗脑的“传教士”阶层。这些人往往是看不见的,你也很难看出他们的作用,但他们在信息传播和管理培训的每一个环节都是真实存在的。英家的简单规矩1、在更改规则之前,请遵守规则。但重要的是前者;2、即使有必要,也不要重复任何事情;3、积极收集信息,尽量获取第一手信息,而不是将其传递给他人;4、简洁、直接、切中要害;5、寻找结成联盟而不是敌对的方法;6、找到问题的解决方案,而不是只看问题所在;7、追求至高无上的权威,把控过程,对结果表现出宽容;8、做一个好的谈判者,与大家保持相互理解,但这是手段,不是目的;9。如果您在开始时看到计划,它将自动跨越所有步骤。...

    2022-05-13

  • 鱼的诱惑pdf电子版|百度网盘下载

    编辑评论:马鱼的诱惑df电子书是作者张万新的长篇小说。这部作品是基于作者多年在舞台上的所见所闻和感受。这本小说集包含14个有趣的故事。故事和人物都很生动。马嘴鱼的诱惑df简介在川渝地区,有些人像老人一样,无所事事,没有追求,穿着拖鞋​​,旧衬衫,挥舞着破烂的扇子。他们要么喝茶,要么喝得酣畅淋漓。他们可以随时架起龙门,谈江湖,谈英雄,谈兄弟,谈女人,从天到地,从中国到美国,从古到今。人人不显山露水,却难逃惊心动魄的体验,有刀光剑影,有爱恨情仇。录下来就行了,是小说,可以拍电影。莫言有故事,但缺乏讲故事的能力;哈金有讲好故事的能力,但缺乏好故事。和他们相比,张婉馨要幸运的多。他在世上多年,能捕捉到接地气的好故事。他也很会讲故事,他说(写)的东西很吸引人。但他的野心还不够。他的好故事大多是在酒桌上讲的,留下来的寥寥无几。最后只写了14本小说,现在都编成了一本书,就是《马鱼的诱惑》。十四个精彩的故事和三十多个生动的人物。在故事中他们是惊人的,在故事之外他们什么都不是。河流和湖泊无处不在。我们周围的河流和湖泊同样汹涌和危险。马嘴鱼的诱惑df作者简介张万新,重庆酉阳人,高中时期就开始写诗。现居重庆。张万新自己就是接任二线二线的高手。他有毒。他不仅对外国文学有深入的研究,而且是第一个推荐理查德·福特和舍伍德·安德森的人;他还善于发现和鼓励年轻的小说家。他唇边的话是:“你天生就是写小说的。”没想到,这句话更适合他。张万新的经历是多种多样的。他曾看守台球厅,做过伐木工,做过图书编辑,还拍过纪录片。数千人像海一样躲在一起,每个人都可以和每个人一起喝酒,聊天,玩耍。颇有古龙金庸武侠小说中的隐士风范。他的厉害之处在于,他不仅能看到平凡生活中蕴含的传奇故事,还能在平凡人身上找到英雄气概。对他来说,生活就是江湖。哪怕没有剑光剑影,也同样惊心动魄。马鱼的诱惑df小说目录001仙客来016椅子032马嘴047与马嘴有关的一些事051与泰森打架068老水手087不要杀人103粒神药117只鸭子1321990年代后期的坏人143歌曲德语149控制女人的头170让我们拍一部电影176人的大腿骨186名在校学生...

    2022-05-13 关于湖泊的故事 与河流有关的故事

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